末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(terminal deoxyribonucleotidyl transferase,TdT,簡(jiǎn)稱末端轉(zhuǎn)移酶),是從動(dòng)物(通常是牛) 胸腺和骨髓中分離提取的。

末端轉(zhuǎn)移酶催化脫氧核苷酸添加到DNA 分子的3'-OH 末端,催化作用不需要模板,但需Co2+ 的存在。末端轉(zhuǎn)移酶可給一群DNA 分子的3' -OH末端接上寡dA 或dC,而給另一群DNA 分子的3'-OH 末端接上寡dT 或dG,兩群分子混合即可使同聚物尾部退火形成環(huán)狀分子。

正文

末端轉(zhuǎn)移酶的主要用途包括:

(1)給載體或CDNA加上互補(bǔ)的同聚尾(用于建立體外重組DNA分子時(shí)在DNA片段末端加上一一個(gè)同聚物尾巴,兩種不同的DNA分子加上不同的但可以互補(bǔ)的即A和T、C和G的尾巴后,經(jīng)過退火或復(fù)性,兩種尾巴便可以借助互補(bǔ)作用連接在一起)。在CDNA文庫建立時(shí),這種加尾方法是使CDNA插人載體中的常用方法之一。

(2)用于DNA片段3'末端的放射性核素標(biāo)記。末端轉(zhuǎn)移酶在Mg2*存在的條件下,選擇3'-OH端單鏈DNA為引物加成核苷酸,在CO+存在的條件下,選擇3'-OH端雙鏈DNA為引物加成核苷酸,形成多聚核苷酸尾。如果在反應(yīng)系統(tǒng)中加人核素標(biāo)記的核苷酸,那么便可得到3'端標(biāo)記的DNA分子。該法常用于核酸末端標(biāo)記和核酸連接的互補(bǔ)多聚尾(連接頭)。