降落PCR(touchdown PCR),一種PCR技術(shù)。

簡介

設(shè)計多循環(huán)反應(yīng)的程序,以使相連循環(huán)的退火溫度越來越低。由于開始時的退火溫度選擇為高于估計的Tm值,隨著循環(huán)的進行,退火溫度逐漸降到Tm值,并最終低于這個水平,用于確保第一個引物—模板雜交事件發(fā)生在最互補的反應(yīng)物之間,即那些產(chǎn)生目的擴增產(chǎn)物的反應(yīng)物之間。盡管退火溫度最終會降到非特異雜交的Tm值,但此時目的擴增產(chǎn)物已開始幾何擴增,在剩下的循環(huán)中處于超過任何滯后(非特異)PCR產(chǎn)物的地位。

由于目標(biāo)是在較早的循環(huán)中避免低Tm值配對,在TD—PCR中最好應(yīng)用熱啟動技術(shù)。設(shè)計時,退火溫度的范圍應(yīng)跨越15℃左右,從高于估計Tm值至少幾度到低于它10℃。

其他特性

例:一對沒有簡并的引物—模板的計算Tm值為62℃。

則:從65℃—>50℃(每2cycles降退火溫度1℃),再在50℃退火溫度下做15個循環(huán)。

實驗中如持續(xù)出現(xiàn)假象帶(雜帶),則是因為起始退火溫度太低,或目的擴增產(chǎn)物和非目的產(chǎn)物的Tm值相差無幾,或非目的擴增物以更高的擴增效率擴增,可把退火溫度每降低1℃所需的循環(huán)數(shù)增加到3或4。